《侦探歌剧 少女福尔摩斯 第二幕》继续以侦探之都横滨为舞台，讲述四位立志成为名侦探的少女——夏洛克·雪莉福德、艾露克露·伯顿、让崎妮洛和柯蒂妮娅·格拉卡组成的“福尔摩斯”小队与怪盗们斗智斗勇的故事。在这个被称为“大侦探时代”的二十一世纪，世界上存在着名为“TOYS”的特殊能力，侦探与怪盗们利用这些能力展开激烈的对决。本季中，福尔摩斯小队不仅要面对新的怪盗挑战，还要解开隐藏在案件背后的更大谜团。与此同时，她们与曾经的侦探青年托艾特之间的关系也逐渐加深，共同成长并迈向更高的目标。故事充满了搞笑与日常的轻松氛围，同时也展现了少女们追求梦想的勇气与决心。