《一吻定情2大学篇》讲述相原琴子（美沙玲奈饰）与天才男友入江直树（佐藤宽太饰）终于考入斗南大学后的甜蜜波折。琴子进入文学系"大学F班"，而直树则就读精英云集的理工学院。为追随恋人脚步，琴子加入直树所在的网球部，却遭遇严苛训练与情敌松本裕子的双重挑战。当网球部前辈须藤加入感情漩涡，四人关系变得微妙复杂。剧中琴子父亲（阵内孝则饰）与直树父母（石田光、石冢英彦饰）继续上演爆笑互动，而金之介（大仓士门饰）和同级生理美（山口乃乃华饰）的加入，让这段大学恋情更添青春活力。在学业、社团与多角恋的夹击下，笨拙却执着的琴子将如何守护来之不易的爱情？